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Dernière mise à jour : Mai 2018

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Biologie du Développement et Reproduction

Biologie du Développement & Reproduction

Atelier de modification génétique chez les mammifères non rongeurs

Atelier de modification génétique chez les mammifères non rongeurs
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Principe de la technologie « CRISPR/Cas9 »

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Injection d’ADN dans un embryon unicellulaire

La production de modèles animaux génétiquement modifiés est obtenue par surexpression ou invalidation d’un gène ou encore par mutagénèse dirigée ou ciblée.

Ces trois approches sont obtenues par micro-injection dans des embryons, au stade unicellulaire, d’ADN, d’ARN ou de vecteurs viraux.

Cette activité est principalement développée dans le cadre des recherches menées par l’équipe ER3 sur la différenciation gonadique, dans le cadre de collaboration intra-unité ou avec des laboratoires extérieurs (INRA, INSERM, CNRS, partenaires privés).

Nous produisons en majorité des modèles chez le lapin, une unité expérimentale à proximité de l’atelier nous assurant la disponibilité des animaux et l’entretien des lignées obtenues (UCEA-Unité Commune d’Expérimentation Animale). Toutes les compétences sont également présentes pour produire des modèles chez les ruminants et plusieurs succès ont été obtenus chez le mouton et la chèvre.

Le personnel de l’atelier possède un savoir faire dans les domaines suivants :

  • production d’animaux transgéniques par microinjection d’ADN (transgénèse additive, injection de grands fragments d’ADN issus de BACs, Knock down par addition de si- ou mi-RNA).
  • invalidation de gène (Knock Out) par utilisation de nucléases spécifiques (mise en œuvre de la technologie CRISPR/Cas9),
  • recombinaison homologue (Knock In, remplacement allélique) à la faveur de la coupure induite par une nucléase spécifique de la région étudiée
  • transfert nucléaire dans l’ovocyte
  • génotypage des animaux
  • cryopréservation de lignée à partir d’embryons ou de sperme
  • construction de gènes.

L’atelier propose une aide à la conception de l’ensemble de l’expérimentation pour produire la modification génétique désirée: design du transgène, définition de la stratégie d’utilisation de la méthodologie CRISPR/Cas9, discussion autour de la stratégie d’amplification des lignées d’animaux génétiquement modifiés.

Les services mis en place par l’UCEA et l’UMR BDR offrent la possibilité d’expérimentation (échographie, iDXA, électrocardiographie, télémétrie) et de phénotypage des lignées obtenues.

Contact : Geneviève Jolivet (genevieve.jolivet@jouy.inra.fr).

Publications

Odening, K. E., Bodi, I., Franke, G., Rieke, R., de Medeiros, A. R., Perez-Feliz, S., Fuerniss, H., Mettke, L., Michaelidis, K., Lang, C. N., Steinfurt, J., Pantulu, N. D., Ziupa, D., Menza, M., Zehender, M., Bugger, H., Peyronnet, R., Behrends, J., Doleschall, Z., zur Hausen, A., Bode, C., Jolivet, G., Brunner, M., 2018. Transgenic short-QT syndrome 1 rabbits mimic the human disease phenotype with QT/APD shortening in the atria and ventricles and increased VT/VF inducibility. Eur Heart J, 400 (10): 842-853 https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehy761

Sarradin, P., Viglietta, C., Limouein, C., Andréoletti, O., Daniel-Carlier, N., Barc, C., Leroux-Coyau, M., Berthon, P., Chapuis, J., Rossignol, C., Gatti, J-L., Belghazi, M., Labas, V., Vilotte, J-L., Beringue, V., Lantier, F., Laude, H., Houdebine, L-M., 2015. Transgenic rabbits expressing ovine PrP are susceptible to scrapie. Plos Pathogens, 11 (8): e1005077 https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005077

Jolivet, G., Braud, S., DaSilva, B., Passet, B., Harscoët, E., Viglietta, C., Gautier, T., Lagrost, L., Daniel-Carlier, N., Houdebine, L.M., Harosh, I., 2014. Induction of body weight loss through RNAi-knocdown of APOBEC1 gene expression in transgenic rabbits. PLos One, 9 (9): e106655  https://doi.org/10.1371/journal.pone.0106655

Boulanger, L., Pannetier, M., Gall, L., Allais-Bonnet, A., Elzaiat, M., Le Bourhis, D., Daniel, N., Richard, C., Cotinot, C., Ghyselinck, N.B., Pailhoux, E., 2014. FOXL2 is a female sex–determining gene in the goat. Curr Biol, 24 (4): 404-408 https://doi.org/10.1016/j.cub.2013.12.039

Boulanger, L., Passet B, Pailhoux, E., Vilotte JL., 2012. Transgenesis applied to goat: current applications and ongoing research. Transgenic Res, 21: 1183-1190 https://doi.org/10.1007/s11248-012-9618-y

Degrelle, S., Jaffrezic, F., Campion, E., Lê Cao, K-A., Le Bourhis, D., Richard, C., Rodde, N., Fleurot, R., Everts, R. E., Le cardonnel, J., Heyman, Y., Vignon, X., Yang, X., Tian, X.C., Lewin, H. A., Renard, J-P, Hue, I., 2012. Uncoupled embryonic and extra-embryonic tissues compromise blastocyst development after somatic cell nuclear transfer. Plos One, 7 (6): e38309 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0038309

Masson, D., Deckert, V., Gautier, T., Klein, A., Desrumaux, C., Viglietta, C., Pais de Barros, JP., Le Guern, N., Grober, J., Labbé, J., Ménétrier, F., Ripoll, PJ., Leroux-Coyau, M., Jolivet, G., Houdebine, L-M.., Lagrost, L., 2011. Worsening of Diet-Induced Atherosclerosis in a New Model of Transgenic Rabbit Expressing the Human Plasma Phospholipid Transfer Protein. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31: 766-774 https://doi.org/10.1161/ATVBAHA.110.215756

Boulanger, L., Kocer, A., Daniel, N., Pannetier, M., Chesné, P., Heyman, Y., Renault, L., Mandon-Pépin, B., Chavatte-Palmer, P., Vignon, X., Vilotte, JL., Cotinot, C., Renard, JP., Pailhoux, E., 2008. Attempt to rescue sex-reversal by transgenic expression of the PISRT1 gene in XX PIS-/-goats. Sex. Dev, 2:142-151 https://doi.org/10.1159/000143432

Soler, E., Parez, N., Passet, B., Dubuquoy, C., Riffault, S., Pillot, M., Houdebine, L-M., Schartz-Cornil, I., 2007. Recombinant rotavirus inner core proteins produced in the milk of transgenic rabbits confer a high level of protection after intrarectal delivery. Vaccine 25 (34): 6373-6380 https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2007.06.011